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發布時間:2022-04-01 16:12:06 作者:知網小編 來源:www.elxoepd.cn
雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復性動力學和熱穩定性。 雜交液的基礎成分為:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),異源核酸(如鯡精子DNA/tRNA/競爭DNA),磷酸鈉,EDTA,SDS,鹽離子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及雜交探針。
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測,與免疫組化技術的結合應用,能將 DNA 、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。 1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術的發展,及不同探針標記系統和檢測系統的應用,大大增加了原位雜交檢測的應用靈活性和檢測靈敏度。
③RNA 雜交體穩定性高,所以探針在雜交反應中產生的信號較DNA 探針強,等優點。 核酸的分子雜交可分成液相雜交和固相雜交兩大類。 液相雜交是將待檢測的核酸樣品和同位素標記的雜交探針同時溶于雜交液中進行反應,然后分離雜交雙鏈和未參加反應的探針,用儀器計數并通過計數分析雜交結果。
1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術的發展,及不同探針標記系統和檢測系統的應用,大大增加了原位雜交檢測的應用靈活性和檢測靈敏度。 基于地高辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統是常見的原位雜交檢測方法。